眼瞅著十一假期越來越近，原本計(jì)劃做好實(shí)驗(yàn)放飛自我，數(shù)據(jù)卻一直出不來，別人做蛋白純化幾天搞定，我做蛋白純化只能靠手動，半個月反反復(fù)復(fù)結(jié)果依舊讓人... 我：「老師，我選擇的是凝膠過濾色譜法，我的目標(biāo)蛋白電荷密度并不高，上樣的量也不大，但分辨率就是不高，而且有好多成分我還是想回收一下但做不到。 」 老師：「分辨率不高這個問題，首先樣品與洗脫料液比應(yīng)該保持一致，其次要再檢查一下色譜柱裝填是否勻?qū)?/span>了，這些都會影響分辨率。層析液全收集這個事兒是這樣，咱現(xiàn)在的儀器通路是有限的，只能收集這么多，你就盡量挑你關(guān)注的來吧?！?/p> 我：「行吧，那實(shí)驗(yàn)過程中會出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象，這個是什么原因呢？」 老師：「有可能是你實(shí)驗(yàn)的蛋白自身不穩(wěn)定，需要檢查緩沖體系是否適宜，環(huán)境是否溫度太高，你可以加入肌氨酸鈉，迅速使蛋白變性，渾濁現(xiàn)象會消除?！?/p> 我：「老師，還有，還有問題，這個儀器鎳柱好像堵了，每次開機(jī)要啟動好久，基線還漂移的很過分，平衡的時間越來越久，一上午都耗在等機(jī)子上了?！?/p> 老師：「這個機(jī)器的鎳柱是剛換的，如果你樣品雜質(zhì)顆粒處理的比較好，液料比也合適的話，就要看純化上清時蛋白質(zhì)有沒有產(chǎn)生絮狀沉淀，盡快加入 DTT 還原。至于基線花長時間都不平的問題啊，同學(xué)們給我反映很多次了，但儀器用的太久了，我也很無奈。」 我：「老師，我以前一直以為是我沒有找到軟件，怎么自動換算 AU 值，結(jié)果發(fā)現(xiàn)大家都是手動自己算的。」 老師：「咱的這臺儀器都『老當(dāng)益壯』這么久了，電腦也卡，啟動也慢，啥都得手動，但是換一臺全自動進(jìn)口的實(shí)在是太貴，公共實(shí)驗(yàn)室地方緊緊巴巴，便宜一點(diǎn)的吧，全是手動也不劃算，跟學(xué)院申請了很多次了，經(jīng)費(fèi)也有限，確實(shí)挺為難的。」 我：老師還是厲害啊，但是 3 天要搞定實(shí)驗(yàn)，實(shí)在有點(diǎn)為難，要如何才能搞定呢？ 老師：雖然我平時扣扣搜搜的，那也是沒辦法，這次我給你們特別準(zhǔn)備了一臺全自動蛋白純化儀，*你們?nèi)粘Ｊ褂?，勝任常?guī)蛋白純化~ 我：全自動?。?！ 老師：你趕緊掃下二維碼去試用吧，用的好就買，這臺儀器費(fèi)用還可以，為師還有些經(jīng)費(fèi)能支持。 這臺能入我老板法眼的蛋白純化儀究竟有何來歷： Blupadstart 蛋白純化系統(tǒng)，小巧緊湊的一體化設(shè)計(jì)，能夠開展各種常用的純化技術(shù)，如親和層析、離子交換層析、脫鹽和緩沖液交換，以及凝膠過濾，通過 Blupadstart、預(yù)定義模板或自定義方法實(shí)現(xiàn)全自動多蛋白純化，操作界面簡潔，流程直觀，滿足科研需求的同時讓一切簡單起來： 開機(jī)即可檢測：緊湊型一體機(jī)，配備高清 10.1 寸觸摸屏點(diǎn)擊運(yùn)行，開機(jī)基線即可平衡，無需預(yù)熱； 檢測靈敏：標(biāo)配 260/280 mm 固定波長，5 萬小時壽命 LED 冷光源，步進(jìn)電機(jī)程序控制檢測系統(tǒng)； 軟件功能強(qiáng)大：中英文操作界面可互換，UV、梯度譜線、溫度電導(dǎo)率、收集試管號同屏幕顯示，可實(shí)時監(jiān)測，范圍廣、精度高，并可進(jìn)行補(bǔ)償； 獨(dú)立運(yùn)行的餾分收集器：XY 軸模式，支持全收，按峰收集，美國進(jìn)口進(jìn)樣閥和三通收集閥，支持 Load、Inject、Waste 功能； 實(shí)時修改運(yùn)行參數(shù)：高精度恒流泵系統(tǒng)，可提供連續(xù)、穩(wěn)定的精準(zhǔn)流速（流速范圍 0.1～10 mL/min，最大耐壓壓力 3bar），支持實(shí)時在線修改梯度和流速； 兼容所有層析填料：Size Exclusion（SEC）－分子篩、凝膠過濾，（HIC和RP）－疏水和反相均可適應(yīng) 數(shù)據(jù)實(shí)時保存：實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持 Excel 導(dǎo)出，實(shí)時自動保存，可防止意外斷電導(dǎo)致的數(shù)據(jù)丟失。
只好請教老板，如何快速搞定蛋白純化實(shí)驗(yàn)（文末有法寶，親測管用?。。。?br />
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